Ribosomal Protein S18 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406494

Panoramica

RPS18 codifica la proteina ribosomiale S18, un componente essenziale della piccola subunità ribosomiale 40S che contribuisce a stabilizzare la struttura dell’rRNA e supporta una decodifica accurata durante l’inizio e l’allungamento della traduzione. Nell’ambito della biogenesi dei ribosomi e della sintesi proteica globale, RPS18 contribuisce alla proteostasi, alla crescita cellulare e alle vie di controllo traslazionale adattative allo stress. Un’alterata espressione o perturbazioni delle proteine ribosomiali possono influenzare la segnalazione di stress nucleolare e i checkpoint dipendenti da p53, collegando la disfunzione ribosomiale a cambiamenti nei programmi di proliferazione e apoptosi. La biogenesi ribosomiale e la traduzione deregolate sono caratteristiche ricorrenti del cancro e delle ribosomopatie, rendendo RPS18 un nodo utile per studiare come il macchinario traslazionale di base si interfacci con stati cellulari associati alla malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ribosomal Protein S18 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RPS18 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RPS18 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RPS18 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ribosomal Protein S18.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RPS18 per lo studio della segnalazione di Ribosomal Protein S18, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RPS18 critici per la funzione di Ribosomal Protein S18
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RPS18 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Ribosomal Protein S18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RPS18. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ribosomal Protein S18 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Ribosomal Protein S18 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RPS18 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RPS18 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.