RFRP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406767

Panoramica

NPVF codifica il precursore del peptide correlato alle RFamide, che viene processato per generare i neuropeptidi RFRP, i quali agiscono come ligandi endogeni dei recettori NPFF e modulano la segnalazione neuroendocrina. Nell’uomo, RFRP è implicato nel controllo ipotalamico del rilascio delle gonadotropine e nella temporizzazione dell’asse riproduttivo, integrando segnali che influenzano l’attività dei neuroni GnRH e la secrezione ipofisaria di LH/FSH. Questa via interagisce con reti neuromodulatorie più ampie, mediate da GPCR, che influenzano la risposta allo stress, il bilancio energetico e la fisiologia riproduttiva legata ai ritmi circadiani. Alterazioni della segnalazione NPVF/RFRP sono state studiate nel contesto di disturbi riproduttivi e di stati neuroendocrini disregolati, a supporto di studi meccanicistici sul processamento peptidico, la secrezione e la segnalazione recettoriale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFRP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NPVF in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NPVF insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NPVF a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFRP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NPVF per lo studio della segnalazione di RFRP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NPVF critici per la funzione di RFRP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NPVF per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFRP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NPVF. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFRP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFRP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NPVF per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NPVF definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.