REV1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425035

Panoramica

Rev1 codifica REV1, una polimerasi del DNA della famiglia Y che funziona come scaffold specializzato e come deossicitidil transferasi nella sintesi del DNA per bypass translesionale (TLS), consentendo alla replicazione di procedere attraverso lesioni ingombranti del DNA. REV1 coordina il bypass delle lesioni interagendo con altre polimerasi TLS e si integra con le reti di risposta al danno del DNA che preservano la progressione della forcella replicativa e l’integrità del genoma. Nelle cellule di topo, l’attività di Rev1 influenza i tassi di mutagenesi e l’equilibrio tra processamento delle lesioni con errori e senza errori durante lo stress replicativo. Vie dipendenti da REV1 deregolate sono rilevanti per studi sull’instabilità genomica, sui meccanismi della carcinogenesi e sulla sensibilità cellulare a fattori genotossici.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO REV1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rev1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rev1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rev1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina REV1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rev1 per lo studio della segnalazione di REV1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rev1 critici per la funzione di REV1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rev1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal REV1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal REV1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rev1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal REV1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR REV1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rev1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rev1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.