REP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404025-ACT
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- REP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) è un mediatore sinergico di attivazione (SAM) del sistema di attivazione trascrizionale disegnato per upregolare specificatamente l'espressione genica
- REP-1 CRISPR Activation Plasmid (h) consiste di tre plasmidi in proporzione 1:1:1 : un plasmide che codifica la nucleasi (D10A and N863A) Cas9 (dCas9) deattivata fusa al dominio di transattivazione VP64, ed un gene di resistenza alla blasticina; un plasmide che codifica per la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, ed un gene di resistenza all'igromicina;un plasmide che codifica un RNA guida di 20 nt target specifico, e un gene di resistenza alla puromicina.
- Il complesso SAM legae una regione sito-specifica circa 200-250 nt a monte del sito di start trascrizionale e fornisce un robusto reclutamento di fattori trascrizionali per un'attivazione altamente efficiente del gene target
- I gRNA codificati dal REP-1 CRISPR Activation Plasmid (h) e dal REP-1 CRISPR Activation Plasmid (h2) prendono di mira regioni regolatorie distinte a monte del sito di inizio della trascrizione di CHM. Uno o entrambi i modelli potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: REP-1 Antibody (2F1): sc-23905
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
REP-1 Plasmide di attivazione CRISPR (h) | sc-404025-ACT | 20 µg | $397.00 |
CHM codifica la Rab escort protein 1 (REP-1), uno chaperone citosolico essenziale per la geranilgeranilazione post-traduzionale delle GTPasi Rab, in quanto presenta le proteine Rab neo-sintetizzate alla Rab geranilgeraniltransferasi (GGTasi II). Questa modifica è necessaria per l’associazione delle Rab alle membrane e regola il traffico vescicolare, la dinamica endosoma–lisosoma e la secrezione regolata in molteplici tipi cellulari, incluso l’epitelio pigmentato retinico. L’alterazione della funzione di REP-1 compromette la prenilazione delle Rab e il trasporto intracellulare, processi strettamente legati all’omeostasi dei fotorecettori e dell’RPE. La carenza di CHM è associata alla coroideremia, rendendo REP-1 un nodo rilevante per studi meccanicistici sullo stress del traffico di membrana e su fenotipi cellulari associati alla degenerazione.
REP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CHM senza alterare la sequenza di DNA sottostante.
REP-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CHM nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.
Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CHM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di REP-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CHM nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da REP-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via REP-1 nelle cellule tumorali con espressione di CHM silenziata o ridotta.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.