RELA/NFκB p65 Plasmide Double Nickase (m): sc-422642-NIC

Il gene murino **Rela** codifica la subunità **RELA/NFκB p65**, un regolatore trascrizionale centrale della segnalazione canonica di **NF-κB** che si associa a **NF-κB1 (p50)** per controllare l’espressione genica in risposta agli stimoli. RELA integra segnali provenienti dalle vie del recettore del TNF, IL-1/TLR, recettori dell’antigene e danno al DNA per coordinare citochine infiammatorie, chemochine, molecole di adesione, programmi di sopravvivenza cellulare e geni effettrici dell’immunità innata. La sua attività è regolata in modo stringente dal sequestro da parte di IκB e dalla fosforilazione mediata da IKK, che porta alla traslocazione nel nucleo e al legame alla cromatina. Una segnalazione RELA deregolata è ampiamente implicata in infiammazione cronica, autoimmunità, risposte alle infezioni e processi oncogenici, attraverso un’alterata resistenza all’apoptosi e il rimodellamento del microambiente infiammatorio.

RELA/NFκB p65 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Rela nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Rela. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Rela. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Rela interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.