RANTES Plasmide Double Nickase (m): sc-422845-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- RANTES Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il RANTES Double Nickase Plasmid (m) e il RANTES Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Ccl5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: RANTES Antibody (A-4): sc-365826
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
RANTES Plasmide Double Nickase (m) | sc-422845-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RANTES Plasmide Double Nickase (m2) | sc-422845-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Ccl5** codifica **RANTES**, una chemochina che coordina il traffico dei leucociti legandosi a **CCR1**, **CCR3** e **CCR5** per promuovere chemotassi, adesione e attivazione delle cellule immunitarie. La segnalazione di RANTES si integra con vie dipendenti dai **GPCR** che regolano il rimodellamento dell’actina, l’attivazione delle integrine e le reti di citochine, plasmando i microambienti infiammatori nei tessuti periferici. Un’espressione alterata di **Ccl5** è spesso studiata in modelli di infiammazione cronica, patologia autoimmune, infezione virale e interazioni tumore–sistema immunitario, in cui il reclutamento di cellule mieloidi e linfociti T influenza i fenotipi di malattia. In quanto mediatore chiave del posizionamento delle cellule immunitarie, **Ccl5** è ampiamente utilizzato per investigare la sorveglianza immunitaria, l’infiammazione tissutale e il crosstalk tra stroma e sistema immunitario nei modelli murini.
RANTES Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Ccl5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Ccl5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Ccl5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Ccl5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.