RAGE Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400284-ACT

AGER umano codifica il recettore per i prodotti finali della glicazione avanzata (RAGE), un recettore di riconoscimento di pattern multiligando della superfamiglia delle immunoglobuline che lega AGEs, S100/calgranuline, HMGB1 e amiloide-β. La segnalazione di RAGE amplifica le risposte infiammatorie e da stress attraverso le vie NF-κB, MAPK/ERK, JNK/p38 e PI3K/AKT, promuovendo la produzione di citochine, lo stress ossidativo e modifiche dell’adesione e della migrazione cellulare. Contribuisce all’attivazione endoteliale e al reclutamento dei leucociti, collegando segnali metabolici e infiammatori al rimodellamento tissutale. Un’attività AGER/RAGE deregolata è stata associata a disfunzione vascolare correlata al diabete, aterosclerosi, infiammazione cronica, neurodegenerazione e infiammazione associata ai tumori, rendendolo un nodo comune per studi di vie di segnalazione e biomarcatori.

RAGE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AGER senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

RAGE Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AGER nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AGER, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di RAGE. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AGER nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da RAGE nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via RAGE nelle cellule tumorali con espressione di AGER silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.