Rad51C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403060-ACT

Il gene umano **RAD51C** codifica **Rad51C**, un paralogo di RAD51 che svolge un ruolo nella ricombinazione omologa e nella rete di risposta al danno del DNA **Fanconi anemia/BRCA**, contribuendo al mantenimento della stabilità del genoma. Rad51C partecipa alla dinamica del filamento nucleoproteico di RAD51, al processamento delle giunzioni di Holliday e alla riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA che insorgono durante lo stress replicativo. Attraverso queste attività, RAD51C sostiene l’integrità del checkpoint della fase S e previene l’accumulo di aberrazioni cromosomiche. Alterazioni della funzione o dell’espressione di RAD51C sono state associate a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a fenotipi di instabilità genomica studiati in oncologia e nei disordini ereditari della riparazione del DNA.

Rad51C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di RAD51C senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Rad51C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus RAD51C nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione RAD51C, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Rad51C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus RAD51C nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Rad51C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Rad51C nelle cellule tumorali con espressione di RAD51C silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.