Qa-1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-420781-ACT

Il gene murino H2-T23 codifica la molecola MHC di classe I non classica Qa-1, una glicoproteina di superficie che regola la sorveglianza immunitaria modulando le risposte delle cellule NK e dei linfociti T CD8+. Qa-1 presenta un repertorio peptidico ristretto, inclusi peptidi derivati dalle sequenze leader, e trasmette segnali attraverso recettori quali CD94/NKG2 sulle cellule NK per modulare citotossicità e tolleranza. Attraverso queste interazioni, Qa-1 influenza le dinamiche di presentazione dell’antigene, l’omeostasi immunitaria e le risposte all’infiammazione. Alterazioni nell’espressione o nel riconoscimento di Qa-1 sono state associate a una disregolazione dell’immunità e sono comunemente studiate in modelli di autoimmunità, infezione ed evasione immunitaria tumorale.

Qa-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di H2-T23 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Qa-1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus H2-T23 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione H2-T23, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Qa-1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus H2-T23 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Qa-1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Qa-1 nelle cellule tumorali con espressione di H2-T23 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.