PTPκ Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-402287-LAC

Il gene umano **PTPRK** codifica la **proteina tirosina fosfatasi recettoriale di tipo K (PTPκ)**, una fosfatasi transmembrana che modula la fosforilazione su tirosina alla superficie cellulare e contribuisce a coordinare i segnali che regolano l’adesione cellula–cellula, l’integrità delle giunzioni e l’organizzazione del citoscheletro. Attraverso la regolazione della segnalazione di chinasi recettoriali e non recettoriali, PTPκ influenza vie associate all’inibizione da contatto, alla funzione di barriera epiteliale e al comportamento migratorio. Alterazioni dell’attività o dell’espressione di PTPRK sono state associate a reti di fosforilazione deregolate in processi legati al cancro, inclusi l’invasione e cambiamenti dell’architettura tissutale. Queste caratteristiche rendono PTPRK un nodo utile per studiare come la defosforilazione mediata da fosfatasi modelli le dinamiche di segnalazione nelle cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PTPκ (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PTPRK in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PTPκ (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PTPRK, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PTPκ. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PTPRK e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.