PSMC2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405022-ACT

PSMC2 codifica per la subunità regolatoria 7 del proteasoma 26S (Rpt1), un’ATPasi AAA+ all’interno della particella regolatoria 19S che fornisce l’energia per lo svolgimento dei substrati e la loro traslocazione nel core 20S per la degradazione proteica dipendente dall’ubiquitina. Attraverso il controllo della proteostasi, PSMC2 influenza la progressione del ciclo cellulare, le risposte al danno al DNA, la segnalazione da stress e il processamento dell’antigene, integrandosi con vie quali il turnover ubiquitina–proteasoma, la regolazione di NF-κB e l’adattamento allo stress proteotossico. Alterazioni dell’attività del proteasoma e dell’espressione delle subunità regolatorie sono spesso associate a fenotipi proliferativi e a un controllo dei checkpoint deregolato osservati in diversi contesti patologici, rendendo PSMC2 un nodo utile per studiare il controllo di qualità delle proteine e il rimodellamento delle reti regolatorie. La perturbazione dei livelli di PSMC2 può quindi aiutare a indagare come le funzioni ATP-dipendenti del proteasoma plasmino i programmi trascrizionali e la fitness cellulare.

PSMC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PSMC2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PSMC2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PSMC2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PSMC2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PSMC2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PSMC2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PSMC2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PSMC2 nelle cellule tumorali con espressione di PSMC2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.