pS2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402867-ACT

TFF1 codifica il fattore trefoil secreto pS2, un piccolo peptide associato alle mucine che contribuisce al mantenimento della barriera epiteliale, alla riparazione dopo lesione e alla modulazione dell’infiammazione mucosale. pS2 partecipa a processi legati alla migrazione cellulare, alle interazioni cellula–cellula e alla protezione dallo stress da proteasi e da acidi, con un’espressione regolata da programmi trascrizionali sensibili agli ormoni. Nei tessuti umani, TFF1 è studiato soprattutto nell’epitelio gastrointestinale e mammario, dove alterazioni dei pattern di espressione sono associate allo stato di differenziazione epiteliale e a una segnalazione proliferativa deregolata. Queste caratteristiche rendono TFF1/pS2 un utile readout molecolare delle vie che governano l’omeostasi mucosale, il rimodellamento epiteliale e la regolazione trascrizionale rilevante per il cancro.

pS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di TFF1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

pS2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus TFF1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione TFF1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di pS2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus TFF1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da pS2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via pS2 nelle cellule tumorali con espressione di TFF1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.