PRMT1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402249-ACT

PRMT1 (protein arginine methyltransferase 1) è la principale PRMT di tipo I nelle cellule umane e catalizza la dimetilazione asimmetrica dei residui di arginina sugli istoni e su numerosi substrati non istonici. Attraverso queste modifiche post-traduzionali, PRMT1 regola l’accessibilità della cromatina, i programmi trascrizionali, il processamento dell’RNA, le risposte al danno del DNA e la trasduzione del segnale, con collegamenti rilevanti agli output delle vie MAPK/ERK e PI3K/AKT tramite interazioni proteiche dipendenti dalla metilazione. L’attività di PRMT1 modella la progressione del ciclo cellulare, gli stati di differenziamento e l’adattamento allo stress coordinando il controllo epigenetico e post-trascrizionale. Un’espressione deregolata di PRMT1 o pattern alterati di metilazione dei substrati sono spesso studiati in biologia del cancro, nella segnalazione immunitaria e nelle neuroscienze come correlati molecolari di cambiamenti nell’espressione genica e nella funzione del proteoma.

PRMT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PRMT1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRMT1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PRMT1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PRMT1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRMT1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PRMT1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRMT1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRMT1 nelle cellule tumorali con espressione di PRMT1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.