PRL-3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-402331-ACT

PTP4A3 codifica PRL-3, una fosfatasi tirosinica proteica prenilata che si localizza alle membrane intracellulari e modula reti di segnalazione dipendenti dalla fosforilazione che controllano la migrazione cellulare, il rimodellamento del citoscheletro e la proliferazione. PRL-3 è stata collegata alla regolazione di vie che includono PI3K/AKT, MAPK/ERK e la segnalazione delle GTPasi della famiglia Rho, influenzando la dinamica dell’adesione e fenotipi invasivi. L’espressione deregolata di PTP4A3/PRL-3 è frequentemente studiata nel contesto della progressione tumorale e della biologia delle metastasi, dove correla con programmi di sopravvivenza e motilità alterati. Come bersaglio genico umano, PTP4A3 viene utilizzato per indagare il rimodellamento, guidato dalle fosfatasi, dei circuiti di segnalazione e degli stati trascrizionali rilevanti per la trasformazione oncogenica e l’adattamento al microambiente.

PRL-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PTP4A3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PRL-3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PTP4A3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PTP4A3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PRL-3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PTP4A3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PRL-3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PRL-3 nelle cellule tumorali con espressione di PTP4A3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.