PPARβ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400523-ACT

PPARD codifica il recettore attivato dai proliferatori dei perossisomi beta (PPARβ), un recettore nucleare attivato da ligandi che funziona da fattore di trascrizione regolando la gestione dei lipidi, l’omeostasi del glucosio e il dispendio energetico. PPARβ coordina programmi genici coinvolti nell’ossidazione degli acidi grassi, nella funzione mitocondriale e nel rimodellamento metabolico adattativo, integrando segnali provenienti da mediatori lipidici per controllare la differenziazione cellulare e il tono infiammatorio. Nei tessuti umani, l’attività di PPARD è collegata al metabolismo del muscolo scheletrico, alla biologia dei cheratinociti e alla polarizzazione dei macrofagi, intersecandosi con vie come la segnalazione PPAR e reti più ampie di recettori nucleari. Una segnalazione di PPARβ deregolata è stata associata a fenotipi metabolici e infiammatori ed è frequentemente studiata in contesti quali sensibilità all’insulina, dislipidemia e adattamento metabolico delle cellule tumorali.

PPARβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPARD senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PPARβ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPARD nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPARD, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PPARβ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPARD nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PPARβ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PPARβ nelle cellule tumorali con espressione di PPARD silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.