PMP22 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-422323-ACT

Mouse Pmp22 codifica la proteina mielinica periferica 22 (PMP22), una glicoproteina di membrana tetraspan arricchita nelle cellule di Schwann e nella mielina compatta del sistema nervoso periferico. PMP22 contribuisce alla formazione e al mantenimento della guaina mielinica influenzando l’organizzazione di membrana, la differenziazione delle cellule di Schwann e le vie di proteostasi che controllano il ripiegamento e il traffico delle proteine della mielina. Un’alterazione del dosaggio di PMP22 compromette la dinamica della mielinizzazione e le interazioni assone–glia, rendendo Pmp22 un locus chiave per lo studio dei meccanismi delle neuropatie periferiche, delle risposte allo stress nelle glia mielinizzanti e delle reti di segnalazione legate alla mielina. Nei modelli murini, la modulazione dell’espressione di Pmp22 è comunemente utilizzata per analizzare gli effetti del dosaggio genico sulla stabilità della mielina, sulle proprietà di conduzione nervosa e sui programmi trascrizionali a valle.

PMP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Pmp22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PMP22 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Pmp22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Pmp22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PMP22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Pmp22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PMP22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PMP22 nelle cellule tumorali con espressione di Pmp22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.