PLUNC Plasmide Double Nickase (h): sc-416774-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PLUNC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PLUNC Double Nickase Plasmid (h) e il PLUNC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BPIFA1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PLUNC Antibody (A-11): sc-271457
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PLUNC Plasmide Double Nickase (h) | sc-416774-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PLUNC Plasmide Double Nickase (h2) | sc-416774-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BPIFA1 codifica la proteina umana PLUNC, un membro secreto della famiglia contenente il fold BPI, particolarmente arricchito nell’epitelio delle vie aeree superiori e del rinofaringe. PLUNC contribuisce alla difesa mucosale innata modulando l’omeostasi del liquido di superficie delle vie aeree, influenzando la funzione di barriera epiteliale e interagendo con componenti microbiche che plasmanno la segnalazione infiammatoria locale. L’espressione di BPIFA1 risponde alla differenziazione epiteliale e a segnali infiammatori, collegandola a processi quali le interazioni ospite–patogeno, la clearance mucociliare e la regolazione del microambiente delle vie aeree. Alterazioni dell’abbondanza di BPIFA1/PLUNC sono state riportate in contesti di infiammazione respiratoria e il gene viene spesso studiato in relazione ai meccanismi delle malattie croniche delle vie aeree e al rimodellamento epiteliale.
PLUNC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BPIFA1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BPIFA1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BPIFA1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BPIFA1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.