PLC η2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409214

Panoramica

PLCH2 codifica la fosfolipasi C eta 2 (PLC η2), un enzima specifico per i fosfoinositidi che idrolizza il PIP2 generando IP3 e diacilglicerolo, collegando così la segnalazione lipidica di membrana alla mobilizzazione intracellulare di Ca2+ e all’attivazione della protein chinasi C. Come modulatore del turnover dei fosfoinositidi, la PLC η2 contribuisce al controllo Ca2+-dipendente della trasduzione del segnale, del rimodellamento del citoscheletro e del traffico vescicolare nelle cellule umane. Un’alterazione della segnalazione lipidica mediata dalle PLC è ampiamente rilevante per la disregolazione di proliferazione, differenziamento e risposte allo stress, rendendo PLCH2 un nodo utile per indagare il rimodellamento delle vie di segnalazione nei fenotipi cellulari associati a malattia. Lo studio della PLC η2 può aiutare a chiarire come le dinamiche PIP2/IP3/DAG plasmino i programmi trascrizionali a valle e le reti di effettori Ca2+-dipendenti.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PLC η2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PLCH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PLCH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PLCH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PLC η2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PLCH2 per lo studio della segnalazione di PLC η2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PLCH2 critici per la funzione di PLC η2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PLCH2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PLC η2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PLC η2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PLCH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PLC η2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PLC η2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PLCH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PLCH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.