PLA2R Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-411636-ACT

PLA2R1 codifica il recettore della fosfolipasi A2 (PLA2R), un membro della famiglia delle lectine di tipo C transmembrana di tipo I che lega enzimi di fosfolipasi A2 secreti e altri ligandi, regolando il loro ingresso nelle cellule, la localizzazione e la segnalazione a valle. Attraverso l’endocitosi mediata dal recettore e la modulazione della disponibilità extracellulare di mediatori lipidici, PLA2R può influenzare la segnalazione infiammatoria, le risposte allo stress ossidativo e le interazioni cellula–matrice. In biologia renale, PLA2R è espresso nei podociti ed è ampiamente studiato nel contesto della nefropatia membranosa autoimmune, in cui la reattività immunitaria associata a PLA2R e l’alterata dinamica del recettore sono collegate al danno glomerulare. Più in generale, PLA2R1 è stato analizzato in vie che regolano la sopravvivenza cellulare, programmi associati alla senescenza e il rimodellamento tissutale, a supporto della sua rilevanza in fenotipi legati all’infiammazione e alla fibrosi.

PLA2R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLA2R1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PLA2R Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLA2R1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLA2R1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PLA2R. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLA2R1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PLA2R nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PLA2R nelle cellule tumorali con espressione di PLA2R1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.