PIWIL2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402211-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PIWIL2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PIWIL2 Double Nickase Plasmid (h) e il PIWIL2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PIWIL2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PIWIL2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-402211-NIC | 20 µg | $410.00 |
PIWIL2 (PIWI-like RNA-mediated gene silencing 2) è una proteina Argonaute della sottofamiglia PIWI che lega i piRNA per regolare la stabilità dell’RNA e gli stati epigenetici, con ruoli di primo piano nello sviluppo della linea germinale e nel mantenimento dell’integrità del genoma. Partecipa alla repressione dei trasposoni mediata dalla via dei piRNA, al silenziamento genico post-trascrizionale e alla regolazione associata alla cromatina, limitando così la mobilizzazione degli elementi trasponibili e il danno al DNA. Un’espressione aberrante di PIWIL2 è stata riportata in molteplici contesti tumorali ed è spesso studiata in relazione a programmi di tipo staminale, a un controllo alterato del ciclo cellulare e a reti di piccoli RNA deregolate. PIWIL2 è quindi rilevante per indagare i meccanismi di silenziamento guidati dall’RNA, la regolazione epigenetica e le vie di sorveglianza del genoma nelle cellule umane.
PIWIL2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PIWIL2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PIWIL2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PIWIL2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PIWIL2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.