Phox2b Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401351

Panoramica

PHOX2B codifica Phox2b, un fattore di trascrizione homeobox di tipo “paired-like” che coordina lo sviluppo del sistema nervoso autonomo e la differenziazione dei neuroni noradrenergici controllando programmi di espressione genica durante il patterning della cresta neurale e del rombencefalo. Phox2b regola reti trascrizionali coinvolte nella biosintesi delle catecolamine, nella specificazione neuronale e nella maturazione, interfacciandosi con vie di segnalazione che indirizzano le scelte di destino dei progenitori neurali e l’impegno di linea del sistema nervoso periferico. Un’alterazione della funzione di PHOX2B è fortemente associata alle neurocristopatie, inclusa la sindrome da ipoventilazione centrale congenita, e a tumori dello sviluppo di origine dalla cresta neurale come il neuroblastoma, a riflesso del suo ruolo nell’instaurare e mantenere l’identità dei neuroni autonomi. In quanto regolatore che definisce la linea cellulare, PHOX2B rappresenta un nodo utile per studiare il controllo trascrizionale del neurosviluppo e i meccanismi di stabilità dello stato cellulare e di riprogrammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Phox2b (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PHOX2B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PHOX2B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PHOX2B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Phox2b.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PHOX2B per lo studio della segnalazione di Phox2b, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PHOX2B critici per la funzione di Phox2b
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PHOX2B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Phox2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Phox2b CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PHOX2B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Phox2b Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Phox2b (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PHOX2B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PHOX2B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.