Peroxin 3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-425227

Panoramica

Pex3 codifica la perossina 3, un fattore chiave della biogenesi dei perossisomi che si localizza sulla membrana perossisomiale e contribuisce ad avviare l’assemblaggio della membrana reclutando ulteriori perossine necessarie all’importazione delle proteine della matrice. Attraverso il suo ruolo nella formazione dei perossisomi, PEX3 sostiene vie metaboliche lipidiche tra cui la β-ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga, la sintesi dei fosfolipidi eterei (plasmalogeni) e la detossificazione delle specie reattive dell’ossigeno. La perdita della funzione perossisomiale altera l’omeostasi redox cellulare e la composizione lipidica delle membrane, influenzando il crosstalk mitocondriale e la segnalazione infiammatoria. Nel topo, Pex3 è spesso studiato per modellare difetti della biogenesi perossisomiale e per indagare come la perdita dei perossisomi influenzi lo sviluppo neurologico, il metabolismo epatocellulare e il bilancio energetico sistemico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Peroxin 3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Pex3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Pex3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Pex3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Peroxin 3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Pex3 per lo studio della segnalazione di Peroxin 3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Pex3 critici per la funzione di Peroxin 3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Pex3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Peroxin 3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Pex3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Peroxin 3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Peroxin 3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Pex3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Pex3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.