Peroxin 14 Plasmide Double Nickase (h): sc-405075-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Peroxin 14 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h) e il Peroxin 14 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PEX14. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Peroxin 14 Antibody (1G12): sc-293383
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Peroxin 14 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405075-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Peroxin 14 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405075-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PEX14 codifica la perossina 14, un componente integrale della membrana perossisomiale che funge da fattore di docking per i complessi recettoriali PEX5 e PEX7 durante l’importazione degli enzimi della matrice che presentano segnali di targeting PTS1 e PTS2. Grazie a questo ruolo, PEX14 è centrale per la biogenesi dei perossisomi, il mantenimento della proteostasi dell’organello e vie metaboliche che includono la β‑ossidazione degli acidi grassi a catena molto lunga e l’omeostasi redox cellulare. L’alterazione dell’importazione dipendente da PEX14 compromette il metabolismo perossisomiale e può influenzare secondariamente la funzione mitocondriale, la segnalazione lipidica e la gestione delle specie reattive dell’ossigeno. La disregolazione dell’assemblaggio dei perossisomi e della macchina di importazione è implicata nei disordini della biogenesi perossisomiale e in meccanismi più ampi rilevanti per il neurosviluppo e la disfunzione metabolica.
Peroxin 14 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PEX14 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PEX14. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PEX14. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PEX14 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.