Peg1 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-421634-LAC

Il gene murino Mest, noto anche come Peg1, è un gene imprintato che codifica una proteina simile a un’idrolasi, implicata nella regolazione della crescita embrionale, nella funzione placentare e nell’omeostasi metabolica postnatale. L’espressione di Peg1 è strettamente legata al patterning dello sviluppo e alla biologia del tessuto adiposo, con ruoli riportati nell’adipogenesi, nel bilancio energetico e nei programmi di rimodellamento tissutale. Un’attività di Mest/Peg1 deregolata è stata associata ad alterazioni dell’accumulo di grasso, a fenotipi di crescita e a instabilità epigenetica legata al controllo dell’imprinting. In quanto locus sensibile alla linea cellulare e al contesto, Mest è spesso utilizzato per studiare i meccanismi dell’imprinting, la regolazione genica durante lo sviluppo e il rimodellamento delle vie metaboliche in sistemi modello murini.

Le particelle di attivazione lentivirale Peg1 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Mest in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Peg1 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Mest, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Peg1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Mest e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.