PDGF-C Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401977-ACT

PDGFC codifica il platelet-derived growth factor C (PDGF-C), un fattore di crescita secreto che viene attivato per via proteolitica e segnala principalmente attraverso complessi recettoriali contenenti PDGFRα, regolando la proliferazione e la migrazione delle cellule mesenchimali e il rimodellamento della matrice extracellulare. PDGF-C contribuisce a programmi angiogenici e stromali attivando vie di segnalazione di recettori tirosin-chinasici, tra cui PI3K–AKT e RAS–MAPK, influenzando l’attivazione dei fibroblasti e il comportamento delle cellule perivascolari. Nei tessuti umani, un’espressione disregolata di PDGFC è stata associata a rimodellamento fibrotico e a patterning vascolare aberrante, ed è spesso studiata nel contesto delle interazioni tumore–stroma e della crescita invasiva. Queste funzioni rendono PDGFC un nodo rilevante per analizzare i meccanismi di segnalazione paracrina nello sviluppo, nella riparazione delle ferite e in modelli di malattia guidati dal microambiente.

PDGF-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PDGFC senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PDGF-C Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PDGFC nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PDGFC, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PDGF-C. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PDGFC nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PDGF-C nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PDGF-C nelle cellule tumorali con espressione di PDGFC silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.