PDGF-B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400586

Panoramica

PDGFB codifica la subunità B del fattore di crescita derivato dalle piastrine (PDGF-B), un mitogeno secreto che forma dimeri di PDGF attivi e segnala principalmente attraverso le tirosin-chinasi recettoriali del PDGF per regolare il reclutamento dei periciti, la maturazione vascolare e la proliferazione delle cellule mesenchimali. La segnalazione guidata da PDGF-B attiva le vie MAPK/ERK, PI3K–AKT e PLCγ, modulando il rimodellamento del citoscheletro, la chemiotassi e la deposizione della matrice extracellulare nei compartimenti stromale e vascolare. Un’espressione alterata di PDGFB o l’attivazione dell’asse PDGF è implicata nell’angiogenesi patologica, nel rimodellamento fibrotico e in circuiti di crescita autocrini o paracrini dipendenti da PDGF osservati in diversi microambienti tumorali. Di conseguenza, PDGFB è ampiamente studiato nella comunicazione tra endotelio e periciti, nella biologia della riparazione delle ferite e nelle reti di segnalazione stromale rilevanti per il rimodellamento tissutale e la biologia del cancro.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PDGF-B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PDGFB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PDGFB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PDGFB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PDGF-B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PDGFB per lo studio della segnalazione di PDGF-B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PDGFB critici per la funzione di PDGF-B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PDGFB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PDGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PDGF-B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PDGFB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PDGF-B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PDGF-B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PDGFB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PDGFB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.