PDE7B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411961-LAC

Il gene umano **PDE7B** codifica la fosfodiesterasi 7B, un enzima specifico per il cAMP che idrolizza l’AMP ciclico in 5′-AMP, modulando così l’ampiezza e la durata della segnalazione dipendente da PKA ed EPAC. Controllando i pool intracellulari di cAMP, PDE7B influenza programmi trascrizionali, sopravvivenza cellulare e differenziamento in contesti del sistema immunitario e nervoso, intersecandosi con reti di segnalazione guidate dai GPCR. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di PDE7B sono state studiate in relazione alla segnalazione infiammatoria, alla neurotrasmissione e alla biologia di patologie ematologiche e neurologiche, in cui l’omeostasi del cAMP rappresenta un nodo regolatorio chiave. PDE7B costituisce quindi un utile punto di accesso genetico per analizzare la segnalazione dei secondi messaggeri e il crosstalk tra vie in modelli cellulari meccanicistici.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE7B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PDE7B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PDE7B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PDE7B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PDE7B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PDE7B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.