PCYT2 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-416514

Panoramica

PCYT2 codifica la CTP:fosoetanolamina citidililtransferasi, un enzima limitante della velocità nella via di Kennedy che genera CDP-etanolamina per la biosintesi della fosfatidiletanolamina (PE). Controllando la disponibilità di PE, PCYT2 influenza la biogenesi delle membrane, la composizione delle membrane del reticolo endoplasmatico (RE) e dei mitocondri, la dinamica delle gocce lipidiche e il rimodellamento delle membrane correlato all’autofagia. L’omeostasi fosfolipidica dipendente da PCYT2 si interseca con l’equilibrio energetico cellulare e con vie di segnalazione dello stress che rispondono a variazioni nella composizione lipidica delle membrane. La compromissione genetica o la ridotta attività di PCYT2 è stata associata a fenotipi neuromuscolari e di neurosviluppo ereditari, a supporto della sua rilevanza per modellare nei sistemi cellulari umani i meccanismi patologici legati al metabolismo lipidico.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PCYT2 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PCYT2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PCYT2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PCYT2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PCYT2.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PCYT2 per lo studio della segnalazione di PCYT2, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PCYT2 critici per la funzione di PCYT2
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PCYT2 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PCYT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PCYT2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PCYT2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PCYT2 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PCYT2 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PCYT2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PCYT2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.