PARP1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400046-LAC

PARP1 codifica la poli(ADP-ribosio) polimerasi 1, un enzima nucleare che rileva le rotture a singolo filamento del DNA e catalizza la poli(ADP-ribosil)azione di sé stesso e di proteine associate alla cromatina per coordinare la segnalazione del danno al DNA. Attraverso interazioni con XRCC1 e altri fattori di riparazione, PARP1 regola la riparazione per escissione di basi, la stabilità della forcella di replicazione e il rimodellamento della cromatina, influenzando anche il controllo della trascrizione e la segnalazione infiammatoria. L’attività di PARP1 è integrata con le risposte allo stress dipendenti da ATM/ATR e può modulare la progressione del ciclo cellulare e le decisioni sul destino cellulare in seguito a stress genotossico. Un’espressione o un’attività deregolate di PARP1 sono state associate a instabilità genomica e a fenotipi legati a patologie nella biologia dei tumori e nella ricerca sulla neurodegenerazione.

Le particelle di attivazione lentivirale PARP1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PARP1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PARP1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PARP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PARP1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PARP1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.