PARD6B Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401699

Panoramica

PARD6B codifica una componente centrale del complesso di polarità PAR, che contribuisce a stabilire e mantenere la polarità apico-basale nelle cellule epiteliali e regola la divisione cellulare asimmetrica. Attraverso interazioni con la PKC atipica (aPKC) e altri regolatori della polarità, PARD6B coordina l’assemblaggio delle giunzioni serrate, l’organizzazione del citoscheletro e la migrazione cellulare direzionale, collegando il controllo della polarità alle vie che governano l’architettura tissutale. L’alterazione della segnalazione della polarità è associata a disorganizzazione dell’epitelio, adesione modificata e fenotipi invasivi, rendendo PARD6B rilevante per gli studi sulla progressione tumorale e le metastasi. I programmi di polarità dipendenti da PARD6B sono importanti anche durante lo sviluppo e la differenziazione, in cui il controllo spaziale della segnalazione e l’integrità delle giunzioni contribuiscono a plasmare l’organogenesi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PARD6B (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene PARD6B in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del PARD6B insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto PARD6B a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PARD6B.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di PARD6B per lo studio della segnalazione di PARD6B, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni PARD6B critici per la funzione di PARD6B
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di PARD6B per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PARD6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal PARD6B CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus PARD6B. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PARD6B Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR PARD6B (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia PARD6B per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio PARD6B definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.