PANK2 Plasmide Double Nickase (h): sc-405120-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PANK2 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PANK2 Double Nickase Plasmid (h) e il PANK2 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PANK2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PANK2 Plasmide Double Nickase (h) | sc-405120-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PANK2 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-405120-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La pantotenato chinasi 2 (PANK2) è un enzima mitocondriale che catalizza la prima fase, limitante la velocità, della biosintesi del coenzima A (CoA) a partire dal pantotenato, collegando la disponibilità di vitamina B5 alla produzione cellulare di acil-CoA e al metabolismo energetico. Regolando i pool di CoA, PANK2 influenza la funzione mitocondriale, il metabolismo lipidico e l’omeostasi redox, con effetti a valle su vie quali la β-ossidazione degli acidi grassi e il ciclo dell’acido tricarbossilico (TCA). La disregolazione dell’attività o dell’espressione di PANK2 è associata ad alterazioni del flusso metabolico e a stress mitocondriale, e PANK2 è ampiamente studiata nel contesto della neurodegenerazione e di fenotipi legati alla gestione del ferro, inclusa la neurodegenerazione associata alla pantotenato chinasi (PKAN). Queste caratteristiche rendono PANK2 un bersaglio utile per indagare il controllo metabolico mitocondriale e la segnalazione responsiva allo stress in sistemi cellulari umani.
PANK2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PANK2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PANK2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PANK2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PANK2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.