PAK5 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-404073-LAC

PAK5 (p21-activated kinase 5; PAK7) è una chinasi serina/treonina che agisce come effettore a valle delle GTPasi della famiglia Rho, integrando la segnalazione RAC1/CDC42 con il rimodellamento del citoscheletro, la polarità cellulare e le vie di risposta allo stress. Regola la dinamica dell’actina e i processi associati ai microtubuli che influenzano la crescita dei neuriti, il traffico vescicolare e la segnalazione di sopravvivenza, con connessioni riportate all’attività delle reti MAPK e PI3K/AKT in contesti dipendenti dalle condizioni. Un’espressione o una segnalazione alterata di PAK5 è stata associata a modifiche della motilità cellulare e a fenotipi invasivi, ed è stata studiata in neurobiologia e in programmi di segnalazione rilevanti per il cancro. Queste proprietà rendono PAK5 un bersaglio utile per analizzare il rimodellamento dell’architettura cellulare guidato dalle chinasi e le risposte trascrizionali in sistemi modello umani.

Le particelle di attivazione lentivirale PAK5 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PAK5 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PAK5 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PAK5, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PAK5. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PAK5 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.