PAI-2 Plasmide Double Nickase (h): sc-402054-NIC

SERPINB2 codifica l’inibitore dell’attivatore del plasminogeno-2 (PAI-2), un inibitore delle serin-proteasi che limita principalmente l’attività dell’attivatore del plasminogeno di tipo urochinasi (uPA/PLAU) per modulare la proteolisi pericellulare e il rimodellamento della matrice extracellulare. Attraverso la regolazione della cascata di attivazione del plasminogeno e della segnalazione uPA–uPAR, PAI-2 influenza la migrazione e l’adesione cellulare, nonché programmi di rimodellamento tissutale che si intrecciano con le vie dell’infiammazione e della risposta alle ferite. SERPINB2 è fortemente inducibile da citochine ed endotossine in contesti mieloidi ed epiteliali, collegando la sua espressione all’attivazione dell’immunità innata e agli stati di differenziamento dei macrofagi. Un’attività e firme di espressione SERPINB2/PAI-2 deregolate sono state associate ad alterazioni della fibrinolisi, infiammazione cronica, fibrosi e dinamiche del microambiente tumorale, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sull’equilibrio delle proteasi e sul dialogo immuno–stromale.

PAI-2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus SERPINB2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di SERPINB2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di SERPINB2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con SERPINB2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.