P5CR Plasmide Double Nickase (h): sc-410971-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- P5CR Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il P5CR Double Nickase Plasmid (h) e il P5CR Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PYCR1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: P5CR Antibody (A-12): sc-518219
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
P5CR Plasmide Double Nickase (h) | sc-410971-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
P5CR Plasmide Double Nickase (h2) | sc-410971-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PYCR1 codifica la pirrolina-5-carbossilato reduttasi 1 (P5CR), un enzima mitocondriale che catalizza la conversione dipendente da NAD(P)H della pirrolina-5-carbossilato in prolina, collegando il metabolismo di glutammato/ornitina alla biosintesi della prolina. Attraverso il suo ruolo nel ciclo della prolina, P5CR contribuisce al bilanciamento redox cellulare, all’omeostasi mitocondriale e all’adattamento metabolico in condizioni di stress ossidativo o di carenza di nutrienti. L’attività di PYCR1 si interseca con il metabolismo degli amminoacidi, con il tamponamento delle specie reattive dell’ossigeno e con processi legati alla matrice extracellulare che dipendono dalla disponibilità di prolina. Alterazioni genetiche di PYCR1 sono state associate a fenotipi del tessuto connettivo e del neurosviluppo, rendendolo un nodo utile per studiare la regolazione metabolica e le vie di risposta allo stress.
P5CR Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PYCR1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PYCR1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PYCR1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PYCR1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.