p38 alpha MAPK14 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-424051-ACT

Mapk14 codifica p38 alfa (MAPK14), una chinasi serina/treonina attivata dallo stress che integra citochine infiammatorie, segnali dei recettori Toll-like e stress ambientale in cascate di fosforilazione che controllano la trascrizione, la stabilità dell’mRNA e la traduzione proteica. Nelle cellule di topo, p38 alfa regola ATF2, ELK1 e moduli di chinasi a valle come MAPKAPK2/3, modulando la produzione di mediatori tra cui TNF e IL-6 e influenzando i checkpoint del ciclo cellulare e l’apoptosi. Questa via interagisce con NF-κB e la segnalazione dell’interferone, collegando l’attività di MAPK14 alle risposte immunitarie innate e all’omeostasi tissutale. Una segnalazione p38 deregolata è ampiamente utilizzata come nodo meccanicistico in modelli di malattia infiammatoria, stress metabolico, neuroinfiammazione e segnalazione del microambiente associata al cancro.

p38 alpha MAPK14 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Mapk14 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

p38 alpha MAPK14 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Mapk14 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Mapk14, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di p38 alpha MAPK14. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Mapk14 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da p38 alpha MAPK14 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via p38 alpha MAPK14 nelle cellule tumorali con espressione di Mapk14 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.