p20-ARC Plasmide Double Nickase (h): sc-405006-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- p20-ARC Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il p20-ARC Double Nickase Plasmid (h) e il p20-ARC Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira ARPC4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
p20-ARC Plasmide Double Nickase (h) | sc-405006-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARPC4 codifica p20-ARC, una subunità centrale del complesso Arp2/3 che nuclea reti ramificate di filamenti di actina, necessarie per la formazione dei lamellipodi, il “ruffling” di membrana e il rimodellamento dinamico del citoscheletro. Attraverso la regolazione della polimerizzazione dell’actina, p20-ARC contribuisce a processi quali migrazione cellulare, adesione, endocitosi e fagocitosi, integrando segnali provenienti dalle GTPasi della famiglia Rho e dai fattori promotori della nucleazione per controllare la generazione di forza dipendente dall’actina. Un’attività deregolata di Arp2/3 e dinamiche anomale dell’actina sono state associate a fenotipi di motilità e invasione cellulare alterati, rendendo ARPC4 un bersaglio utile per studiare cambiamenti guidati dal citoscheletro rilevanti per il comportamento delle cellule tumorali e per funzioni neuro-sviluppative o delle cellule immunitarie.
p20-ARC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARPC4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARPC4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARPC4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARPC4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.