OTUD2 Particelle di Attivazione Lentivirale (m): sc-432624-LAC

Yod1 del topo codifica l’enzima deubiquitinante OTUD2, una proteasi della famiglia OTU che idrolizza le catene di ubiquitina per modulare la stabilità proteica e l’ampiezza dei segnali. OTUD2 partecipa al controllo ubiquitina-dipendente della proteostasi, della segnalazione infiammatoria e delle vie di risposta allo stress, influenzando il turnover di regolatori chiave di NF-κB e di circuiti affini dell’immunità innata. Attraverso l’editing dei legami dell’ubiquitina, OTUD2 può plasmare le risposte al danno al DNA e le decisioni sul destino cellulare, aspetti rilevanti per studi sulla disregolazione immunitaria e sulle reti di segnalazione associate ai tumori. Una capacità di deubiquitinazione alterata viene spesso analizzata in modelli di malattie infiammatorie e di biologia del cancro per comprendere come la segnalazione mediata dall’ubiquitina rimodelli i programmi trascrizionali e l’omeostasi cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale OTUD2 (m) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di Yod1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale OTUD2 (m) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione Yod1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di OTUD2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo Yod1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.