Oct3/4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400012-NIC

Il gene umano **POU5F1** codifica il fattore di trascrizione con dominio POU **Oct3/4**, un regolatore centrale della pluripotenza e dell’autorinnovamento nelle cellule staminali embrionali e nelle cellule staminali pluripotenti indotte. Oct3/4 opera all’interno di una rete trascrizionale interconnessa con fattori quali **SOX2** e **NANOG** per controllare l’impegno di linea, l’accessibilità della cromatina e i programmi genici dello sviluppo precoce. La sua attività si interfaccia con vie di segnalazione che influenzano lo stato delle cellule staminali, incluse **TGF-β/SMAD**, **WNT/β-catenina** e **FGF/ERK**, coordinando così i segnali di proliferazione e differenziamento. Un’espressione aberrante di **POU5F1** è associata a programmi trascrizionali legati alla “stemness” in molteplici tumori ed è ampiamente utilizzata come marcatore di cellule indifferenziate e dell’efficienza di riprogrammazione.

Oct3/4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus POU5F1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di POU5F1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di POU5F1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con POU5F1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.