NUDT21 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-402082

Panoramica

NUDT21 codifica una subunità centrale del complesso cleavage factor Im (CFIm), che riconosce i motivi UGUA e promuove la maturazione dell’estremità 3′ e la poliadenilazione dei pre‑mRNA. Influenzando la scelta di siti alternativi di poliadenilazione, NUDT21 contribuisce a controllare la lunghezza della 3′ UTR, la stabilità dell’mRNA e l’efficienza della traduzione, plasmando così programmi di espressione genica legati a proliferazione, differenziamento e risposte allo stress. Un’attività alterata di NUDT21 è associata a cambiamenti diffusi nella poliadenilazione alternativa che possono rimodellare reti regolatorie, inclusi il controllo mediato dai microRNA e le interazioni con proteine leganti l’RNA. La deregolazione di queste vie di processamento dell’RNA è stata implicata in diversi contesti rilevanti per la malattia, tra cui il rimodellamento del trascrittoma associato al cancro e fenotipi del neurosviluppo.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO NUDT21 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene NUDT21 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del NUDT21 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto NUDT21 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina NUDT21.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di NUDT21 per lo studio della segnalazione di NUDT21, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni NUDT21 critici per la funzione di NUDT21
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di NUDT21 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal NUDT21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal NUDT21 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus NUDT21. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal NUDT21 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR NUDT21 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia NUDT21 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio NUDT21 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.