NRAMP2 Plasmide Double Nickase (m): sc-421958-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NRAMP2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NRAMP2 Double Nickase Plasmid (m) e il NRAMP2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Slc11a2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NRAMP2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421958-NIC | 20 µg | $410.00 |
Slc11a2 codifica NRAMP2 (DMT1), un trasportatore di ioni metallici bivalenti accoppiato a protoni che media l’ingresso cellulare del ferro ferroso e di altri metalli di transizione attraverso le membrane endosomiali e la membrana plasmatica. Nelle cellule di topo, NRAMP2 supporta il rilascio di ferro dagli endosomi in modo dipendente dalla transferrina e contribuisce all’assorbimento intestinale del ferro, collegandosi così all’omeostasi del ferro, all’eritropoiesi e alla regolazione metabolica. L’attività di NRAMP2 interseca il traffico endocitico e reti di segnalazione sensibili ai metalli che modellano la funzione mitocondriale e le risposte allo stress ossidativo. La disregolazione di Slc11a2 è associata a fenotipi di sovraccarico di ferro e di anemia ed è ampiamente rilevante in modelli di neurodegenerazione, infiammazione e interazioni ospite–patogeno, in cui la disponibilità di metalli influenza l’idoneità cellulare.
NRAMP2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Slc11a2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Slc11a2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Slc11a2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Slc11a2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.