Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
NP60 Plasmide Double Nickase (m): sc-428689-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NP60 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NP60 Double Nickase Plasmid (m) e il NP60 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Glyr1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NP60 Antibody (D-10): sc-390601
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NP60 Plasmide Double Nickase (m) | sc-428689-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
NP60 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-428689-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Glyr1** codifica **NP60**, una proteina nucleare coinvolta nella regolazione della trascrizione associata alla cromatina e nel mantenimento dell’integrità del genoma. NP60 è stata collegata a complessi che modificano gli istoni e al coordinamento dei programmi trascrizionali con la progressione del ciclo cellulare, a supporto di ruoli nel controllo epigenetico e nelle risposte al danno al DNA. Attraverso queste funzioni, Glyr1/NP60 viene studiata in vie che governano la differenziazione cellulare e la segnalazione da stress, in cui un’alterata regolazione della cromatina può contribuire a fenotipi rilevanti per la malattia. La sua localizzazione nucleare e le sue reti di interazione la rendono un nodo utile per analizzare l’accoppiamento tra trascrizione e cromatina in modelli di ricerca biomedica.
NP60 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Glyr1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Glyr1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Glyr1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Glyr1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.