Notum Plasmide Double Nickase (m): sc-429545-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Notum Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Notum Double Nickase Plasmid (m) e il Notum Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Notum. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Notum Plasmide Double Nickase (m) | sc-429545-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene Notum del topo codifica una carbossilesterasi secreta che deacila i ligandi Wnt, antagonizzando così la segnalazione canonica Wnt/β-catenina e modulando il patterning tissutale e i programmi trascrizionali associati alle cellule staminali. Limitando l’interazione con i recettori Wnt tramite la rimozione della modifica con palmitoleato, Notum contribuisce al controllo a feedback extracellulare dei gradienti di morfogeni e influenza le decisioni di destino cellulare durante lo sviluppo e l’omeostasi dei tessuti adulti. Un’alterata attività di NOTUM è stata collegata a una deregolazione dell’output della via Wnt in contesti quali il rimodellamento osseo, la regolazione metabolica e la biologia tumorale, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici dei processi dipendenti da Wnt. Nei modelli murini, la perturbazione di Notum consente di indagare il crosstalk tra vie di segnalazione che influenza proliferazione, differenziamento e segnalazione della nicchia.
Notum Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Notum nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Notum. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Notum. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Notum interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.