Nidogen Plasmide Double Nickase (m): sc-421895-NIC

Il gene murino Nid1 codifica la nidogena (entactina), una glicoproteina solfatata della membrana basale che fa da ponte tra le reti di laminina e di collagene di tipo IV, stabilizzando l’architettura della matrice extracellulare. La nidogena favorisce l’adesione cellula–matrice, la migrazione e la meccanotrasduzione organizzando gli assemblaggi proteici della membrana basale e influenzando la segnalazione associata alle integrine e la morfogenesi dei tessuti. L’integrità della matrice dipendente da Nid1 è rilevante per studi sulla funzione di barriera vascolare ed epiteliale, sull’organizzazione della giunzione neuromuscolare e sullo sviluppo degli organi, in cui difetti della membrana basale possono alterare la differenziazione e l’omeostasi tissutale. Matrici contenenti nidogena deregolate vengono spesso analizzate in modelli di fibrosi, rimodellamento del microambiente tumorale e danno infiammatorio come determinanti di nicchie tissutali permissive o restrittive.

Nidogen Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Nid1 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Nid1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Nid1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Nid1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.