NGAL Plasmide Double Nickase (m): sc-421398-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- NGAL Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il NGAL Double Nickase Plasmid (m) e il NGAL Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Lcn2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: NGAL Antibody (H-7): sc-515876
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| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
NGAL Plasmide Double Nickase (m) | sc-421398-NIC | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino **Lcn2** codifica la lipocalina associata alla gelatinasi dei neutrofili (**NGAL**), una lipocalina secreta che lega il ferro associato ai siderofori e modula l’omeostasi del ferro durante le risposte immunitarie innate. NGAL è indotta da stimoli infiammatori e partecipa ai programmi di stress epiteliale attraverso vie legate a NF-κB, MAPK e alla segnalazione delle citochine, influenzando il reclutamento dei neutrofili, la difesa della barriera e l’attività antimicrobica. Nei modelli murini, l’alterata espressione di NGAL è spesso utilizzata come indicatore di danno tissutale e rimodellamento infiammatorio, inclusi danno renale, infiammazione epatica, disfunzione metabolica e cambiamenti del microambiente associato ai tumori. I suoi ruoli nel sequestro del ferro e nella regolazione immunitaria rendono Lcn2 un nodo utile per studiare le interazioni ospite–patogeno, lo stress ossidativo e il crosstalk tra stroma e sistema immunitario.
NGAL Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Lcn2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Lcn2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Lcn2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Lcn2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.