NEDD4-L Plasmide Double Nickase (h): sc-403647-NIC

NEDD4L codifica NEDD4-L, una ligasi E3 dell’ubiquitina con dominio HECT che regola il turnover proteico e l’abbondanza delle proteine di membrana catalizzando la coniugazione dell’ubiquitina a specifici substrati. È un modulatore chiave del traffico del canale epiteliale del sodio (ENaC) e dell’omeostasi ionica, e interseca anche le vie di segnalazione legate a crescita e stress attraverso il controllo, dipendente dall’ubiquitina, dei componenti di tali pathway. NEDD4-L è stata implicata nella regolazione della segnalazione TGF-β/SMAD, degli output della via Wnt e di risposte cellulari che modellano i programmi di proliferazione e differenziazione. La disregolazione dell’espressione o dell’attività di NEDD4L è associata ad alterazioni della fisiologia del trasporto epiteliale ed è stata riportata in studi di biologia del cancro e di tratti cardiometabolici, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico nella ricerca sulla segnalazione dell’ubiquitina.

NEDD4-L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus NEDD4L nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di NEDD4L. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di NEDD4L. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con NEDD4L interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.