MYH4 Plasmide Double Nickase (h): sc-400467-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MYH4 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MYH4 Double Nickase Plasmid (h) e il MYH4 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira MYH4. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MYH4 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400467-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MYH4 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400467-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
MYH4 codifica la catena pesante della miosina 4, una proteina motoria contrattile del muscolo scheletrico a contrazione rapida (fast-twitch) che costituisce l’impalcatura dei filamenti spessi e converte l’idrolisi dell’ATP in generazione di forza lungo l’actina. La sua interazione regolata con le catene leggere della miosina e con le proteine strutturali sarcomeriche sostiene il ciclo dei ponti trasversali, l’organizzazione delle miofibrille e una contrattilità specifica per tipo di fibra muscolare. L’espressione di MYH4 contribuisce a vie che controllano l’assemblaggio del sarcomero, l’accoppiamento eccitazione–contrazione e la specializzazione metabolica delle fibre rapide glicolitiche. La disregolazione della composizione delle catene pesanti della miosina e dell’integrità sarcomerica è rilevante negli studi su debolezza del muscolo scheletrico, rimodellamento e fenotipi miopatici in sistemi umani.
MYH4 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus MYH4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di MYH4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di MYH4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con MYH4 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.