MYH11 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400695-ACT

MYH11 codifica la catena pesante 11 della miosina della muscolatura liscia, un componente fondamentale dell’apparato contrattile actomiosinico che consente la generazione di forza e il rimodellamento del citoscheletro nelle cellule muscolari lisce vascolari e viscerali. Attraverso un’interazione con i filamenti di actina dipendente dall’ATP, MYH11 sostiene la contrattilità, il controllo della forma cellulare e i programmi di meccanotrasduzione che si integrano con la segnalazione del calcio, con la dinamica dell’actina mediata da RhoA/ROCK e con il turnover delle adesioni focali. Alterazioni dell’espressione di MYH11 o della sua integrità strutturale possono compromettere la differenziazione della muscolatura liscia e la funzione contrattile, contribuendo all’instabilità della parete vascolare e a una biomeccanica tissutale alterata. MYH11 è inoltre coinvolto in fusioni geniche oncogeniche nelle neoplasie mieloidi, evidenziandone la rilevanza nello studio della regolazione trascrizionale aberrante e di fenotipi specifici di linea cellulare.

MYH11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYH11 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYH11 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYH11 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYH11, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYH11. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYH11 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYH11 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYH11 nelle cellule tumorali con espressione di MYH11 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.