MYBPC3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401409-ACT

MYBPC3 codifica per la proteina C legante la miosina cardiaca, una proteina sarcomerica associata al filamento spesso che modula il ciclo dei ponti trasversali actina–miosina e contribuisce alla cinetica contrattile del muscolo striato. Attraverso una regolazione dipendente dalla fosforilazione e interazioni all’interno della banda A/zona C, MYBPC3 influenza la gestione del calcio, l’assemblaggio delle miofibrille e le vie di segnalazione meccanica che modellano la funzione dei cardiomiociti. Alterazioni genetiche e dell’espressione di MYBPC3 sono fortemente associate a cardiomiopatie ereditarie, in particolare alla cardiomiopatia ipertrofica, e vengono utilizzate per modellare la disfunzione del sarcomero e il rimodellamento maladattativo. In quanto regolatore strutturale specifico del muscolo, MYBPC3 è spesso studiato in cardiomiociti derivati da iPSC per collegare la biologia del sarcomero alle risposte allo stress e all’adattamento energetico.

MYBPC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di MYBPC3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

MYBPC3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus MYBPC3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione MYBPC3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di MYBPC3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus MYBPC3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da MYBPC3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via MYBPC3 nelle cellule tumorali con espressione di MYBPC3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.