MOR-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401224

Panoramica

OPRM1 codifica il recettore μ-oppioide umano MOR-1, un GPCR accoppiato a Gi/Go che lega peptidi oppioidi endogeni e ligandi oppioidi esogeni per regolare l’eccitabilità neuronale e il rilascio di neurotrasmettitori. La segnalazione di MOR-1 inibisce l’adenilil ciclasi, modula le vie cAMP/PKA, attiva le cascate MAPK/ERK e influenza l’attività dei canali ionici, plasmando così la trasmissione sinaptica nei circuiti del dolore, della ricompensa e dello stress. L’attivazione del recettore induce il reclutamento di β-arrestina, la desensibilizzazione e il traffico recettoriale, collegando MOR-1 all’internalizzazione del recettore e a risposte adattative di segnalazione. Alterazioni della funzione o della regolazione di OPRM1 sono state associate a differenze interindividuali nella risposta analgesica, a fenotipi legati all’uso di sostanze e a tratti neuropsichiatrici, rendendolo rilevante per studi meccanicistici in neurobiologia e farmacologia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO MOR-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OPRM1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OPRM1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OPRM1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina MOR-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OPRM1 per lo studio della segnalazione di MOR-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OPRM1 critici per la funzione di MOR-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OPRM1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal MOR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal MOR-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OPRM1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal MOR-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR MOR-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OPRM1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OPRM1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.