Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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MKP-3 Plasmide Double Nickase (h): sc-400850-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- MKP-3 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il MKP-3 Double Nickase Plasmid (h) e il MKP-3 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira DUSP6. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: MKP-3 Antibody (F-12): sc-377070
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
MKP-3 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400850-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
MKP-3 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400850-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
La fosfatasi a doppia specificità 6 (DUSP6), nota anche come fosfatasi della MAP chinasi 3 (MKP-3), è una fosfatasi citosolica che de-fosforila e inattiva preferenzialmente ERK1/2, fornendo così un controllo a feedback negativo della cascata di segnalazione RAS–RAF–MEK–ERK/MAPK. Limitando i programmi trascrizionali guidati da ERK, MKP-3 contribuisce a regolare la proliferazione e la differenziazione cellulare, nonché le risposte alla stimolazione da fattori di crescita. Alterazioni dell’espressione o dell’attività di DUSP6 possono perturbare l’ampiezza e la durata del segnale MAPK, collegando questo regolatore a meccanismi rilevanti per la segnalazione oncogenica, i processi di sviluppo e gli stati cellulari responsivi allo stress. In quanto fosfatasi specifica di via, DUSP6 è spesso utilizzata come readout e come modulatore negli studi sulla dinamica della rete MAPK e sulla regolazione tramite feedback.
MKP-3 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus DUSP6 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di DUSP6. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di DUSP6. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con DUSP6 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.